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      His標簽蛋白純化試劑盒(His-tag Protein Purification Kit)，俗稱(chēng)鎳柱試劑盒，是一種采用了新型的
      His-tag Purification Resin的可以兼容還原劑和螯合劑，并能簡(jiǎn)單、快速、高效并且高特異性地純化His標簽蛋白的試劑盒。試劑盒提供了His標簽蛋白所需的相關(guān)試劑和親和層析柱空柱管，為His標簽蛋白的純化帶來(lái)了極大的便利。
      通常帶有6個(gè)組氨酸標簽的重組蛋白(6xHis-tagged recombinant protein)或帶有6個(gè)以上連續組氨酸標簽的重組蛋白，被稱(chēng)為His標簽蛋白。蛋白樣品溶液通過(guò)His-tag Purification Resin時(shí)，重組蛋白His標簽上的組氨酸殘基能特異性地結合到His-tag Purification Resin中的鎳離子上，其它蛋白則不能被結合。洗滌后，His標簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫，從而被分離純化。His-tag Purification Resin對His標簽重組蛋白的親和力強、選擇性高、結合容量大，可以獲得高純度的His標簽重組蛋白，可用于簡(jiǎn)單、快速、高效地純化細菌、哺乳動(dòng)物細胞、昆蟲(chóng)及桿狀病毒等多種表達系統中表達的His標簽重組蛋白。純化的蛋白可以用于結構和功能研究、抗體制備、蛋白與蛋白相互作用、蛋白與核酸相互作用等方面的研究。
      His-tag Purification Resin采用了一種高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠(Sepharose CL-6B)為基質(zhì)，并使用了進(jìn)一步優(yōu)化的接臂和鎳離子螯合技術(shù)，和目前市售的大多數Ni-NTA agarose或類(lèi)似產(chǎn)品相比，非特異性蛋白結合顯著(zhù)降低，耐受壓力強，鎳離子螯合非常穩定。和同類(lèi)產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品由于鎳離子基本不會(huì )流失，重復使用本純化介質(zhì)時(shí)不需要重新裝載鎳離子。
      Ni-NTA agarose以及絕大多數類(lèi)似的鎳柱產(chǎn)品不能耐受蛋白樣品中常見(jiàn)濃度的還原劑如二硫蘇糖醇(DTT)、β-巰基乙醇等以及常見(jiàn)濃度的螯合劑如EDTA等，但His-tag Purification Resin可以很好地耐受DTT等還原劑以及EDTA等螯合劑。本產(chǎn)品可耐受20mM DTT等還原劑，以及20mM EDTA等螯合劑。這為需要添加還原劑或螯合劑的蛋白樣品的純化提供了可能性。本產(chǎn)品不兼容8M尿素和6M鹽酸胍。對于包涵體蛋白的純化，在采用8M尿素或6M鹽酸胍溶解蛋白的情況下，需要通過(guò)透析去除尿素和鹽酸胍后才能使用本產(chǎn)品進(jìn)行His標簽蛋白的純化。
    His-tag Purification Resin已經(jīng)螯合了鎳離子，呈藍色，凝膠的顆粒直徑為45-165μm?？赡褪艿淖畲髩毫?.025MPa，約合5.8psi。采用固定流速進(jìn)行蛋白純化時(shí)的推薦流速為0.5ml/min。
     His-tag Purification Resin可以高容量、高特異性地結合His標簽蛋白。最大蛋白結合量為20-30mg蛋白/毫升凝膠。實(shí)際使用時(shí)的最大結合量取決于待純化的His標簽重組蛋白的分子量大小，分子量越大則最大結合容量越大，分子量越小則最大結合容量越小。對于分子量為50kD的蛋白，每毫升凝膠的實(shí)際最大純化量約為6-10mg，對于分子量為100kD的蛋白，每毫升凝膠的實(shí)際最大純化量約為12-20mg。但對于分子量相同的蛋白，也會(huì )因為蛋白本身特性的不同，結合的最大容量也會(huì )有所不同。
      His-tag Purification Resin儲存在30%乙醇中，10ml總體積中5ml為凝膠，5ml為液體，需要充分重懸后再吸取。
      一個(gè)包裝的本產(chǎn)品足夠進(jìn)行10次His標簽重組蛋白純化，每次細菌沉淀的濕重約為1克。每次蛋白的最大純化量為10-15mg，具體的最大純化量和蛋白分子量有關(guān)；對于分子量為50kD的帶有His標簽重組蛋白，每次的蛋白最大純化量為3-10mg。在不使用親和層析柱空柱管的情況下，參考本說(shuō)明書(shū)本試劑盒足夠進(jìn)行500次的小量His標簽蛋白純化。

    試劑盒組件：

保存條件：
      4℃保存，至少一年有效。除His-tag Purification Resin外，其余均可以-20℃保存。
注意事項：
     1. 請勿在-20℃或更低溫度冷凍保存His-tag Purification Resin。 
    2.His-tag Purification Resin。使用過(guò)程中，緩沖試劑如Tris、HEPES、MOPS等的濃度不宜超過(guò)100mM，EDTA濃度不宜超過(guò)20mM，SDS和sarkosyl的濃度不宜超過(guò)0.3%，Triton、Tween、NP-40的濃度不宜超過(guò)2%，脫氧膽酸鈉、CHAPS的濃度不宜超過(guò)1%，組氨酸濃度不宜超過(guò)20mM，鈣離子濃度不宜超過(guò)5mM，鈉離子和鎂離子濃度可以高達2M，甘油濃度可以高達50%。其它未提及試劑的兼容性可以參考上述試劑，但還有待實(shí)驗驗證。
    3.His-tag Purification Resin保存和純化過(guò)程中應始終保持凝膠濕潤。
    4.若離心不能完全除去蛋白樣品中的不溶物，可以將樣品溶液用0.45μm的濾膜過(guò)濾。
    5.蛋白樣品收集后宜盡快完成純化工作，并應始終放置在4℃或冰浴，以減緩蛋白降解。為有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加適量的蛋白酶抑制劑混合物。
    6.若使用本說(shuō)明書(shū)提供的條件無(wú)法達到理想的純化效果，可嘗試改變洗滌液和洗脫液中咪唑的濃度和(或)pH，以達到最優(yōu)效果。
    7.本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
    8.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。