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一、細胞培養條件

二、細胞收到后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實(shí)驗室后，先打開(kāi)外包裝，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無(wú)菌操作，培養箱靜置 2-4 小時(shí)。鏡下觀(guān)察：未超過(guò) 80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過(guò) 80%匯合度時(shí)， 根據情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養瓶的話(huà)，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松）

三、細胞培養步驟

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入 6cm 皿中），培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2.加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺， 輕敲幾下培養瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加

1-2mL 培養液后吹勻。

4.按 5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶(hù)收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無(wú)菌操作；將小管細胞轉移至 T25 培養瓶或 6cm 培養皿，加入 5ml 左右完全培養基混勻，放入培養箱過(guò)夜培養后查看細胞密度：若密度未超過(guò) 80%，換液繼續培養， 視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò) 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。