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一、細胞培養條件

二、細胞收到后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到 細胞回到自己的實(shí)驗室后，先打開(kāi)外包裝，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無(wú)菌操作。鏡下觀(guān)察：未超過(guò) 80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養液移入廢液缸中，懸浮細胞需離心處理，加入 6ml 新鮮完全培養基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過(guò) 80%匯合度時(shí)，根據情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

三、細胞培養步驟

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入 6cm 皿中，加入約 6ml 培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及 DMSO，凍存比例為 90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶(hù)收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無(wú)菌操作；將小管細胞轉移至 T25 培養瓶或 6cm 培養皿，加入 5ml 左右完全培養基混勻，放入培養箱過(guò)夜培養后查看細胞密度：若密度未超過(guò) 80%，換液繼續培養， 視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò) 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。