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PCR產(chǎn)物回收試劑盒說(shuō)明書(shū)

（Rev.A）

產(chǎn)品介紹

本試劑盒可從PCR反應體系中回收得到不含鹽或低鹽、不含蛋白質(zhì)、RNA 等雜質(zhì)的高純度DNA 片段。200bp-10kbp的DNA片段回收率 80%以上，并可回收單鏈、雙鏈 DNA片段以及環(huán)狀質(zhì)粒 DNA?；厥盏玫降钠蜠NA均可直接進(jìn)行酶切、酶連、測序反應。

試劑盒組成

一、使用前準備

Buffer PG：開(kāi)蓋后如果長(cháng)時(shí)間未使用，請檢查Buffer PG的pH，確保pH≤7.5。

WB: 使用前請將6 ml(5T裝)/60 ml（50T裝）/240 ml（200T裝）無(wú)水乙醇加入Buffer WB（試劑瓶上有標簽提示）。

二、操作步驟

1.   按照PCR產(chǎn)物：Buffer PG=1:5的比例加入Buffer PG（例如：50 μl PCR反應體系加入250 μlBuffer PG），顛倒混勻。若片段長(cháng)度小于500 bp，按照1:6的比例加入Buffer PG。

2.   （選做）將裝有混合液的EP管轉至高速離心機，室溫下10,000×g離心30 sec到1min，以甩下吸附在離心管壁的殘留溶液，最大限度提高回收率。

3.   將上一步得到的混合液添加至本試劑盒提供的吸附柱G柱中（如一次無(wú)法加完，可分多次加入），室溫下10,000×g離心1 min。棄掉收集管中的廢液。如有需要，此步驟可以重復一次，對低濃度的核酸回收率有較明顯提高。

4.   向吸附柱G柱中加入700 μl Buffer WB ，室溫下13,000×g離心1 min ，棄廢液。

5.   重復步驟4。

6.   室溫下13,000×g離心2 min以徹底甩下Buffer WB的殘留。

7.   取出吸附柱G柱并放入新的EP管中，將吸附柱G柱開(kāi)蓋室溫下靜置2 min，如有需要可放在空調風(fēng)口吹1-2 min，以徹底去除殘留的乙醇。

8.   向吸附柱G柱正中間加入15-50 ?l （建議用量為30μl）Elution Buffer或ddH₂O（50℃水浴后的溶解液溶解效果更好），靜置5 min待吸附的質(zhì)粒完全溶解，室溫下13,000×g離心2 min即得到回收的DNA片段。

注：回收得到的 DNA可直接用于基因克隆、擴增、測序、酶切等。

三、DNA濃度及純度

DNA濃度(?g/ml) = OD₂₆₀× 50×稀釋倍數，OD₂₆₀/ OD₂₈₀約為1.8-2.0。

四、注意事項

本試劑盒只適用于瓊脂糖凝膠電泳產(chǎn)物回收，不適用于聚丙烯酰胺凝膠回收。試劑盒中各成分均有一定的揮發(fā)性，請使用完后立即蓋緊瓶蓋，以防試劑污染或者揮發(fā)而造成效果降低。

五、常見(jiàn)問(wèn)題及解答