免疫組化、Western、ELISA，免疫學(xué)三大工具，分別用于定位，定性和定量。

IHC(免疫組化Immunohistochemistry)

是融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等)，通過(guò)化學(xué)反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來(lái)對組織(細胞)內抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀(guān)察結果，可能出現膜陽(yáng)性、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性。

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗Enzyme linked immunosorbent assay)

用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液，因而沒(méi)有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區別，操作上 開(kāi)始需要將抗原或抗體結合到固相載體表面，從而使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。

WB (蛋白質(zhì)印跡Western Blot)

先要進(jìn)行SDS-PAGE，然后將分離開(kāi)的蛋白質(zhì)樣品用電轉儀轉移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標記物顯色來(lái)檢測樣品，可以用于定性和半定量。

對于IHC來(lái)說(shuō)，定位是免疫組化最大的優(yōu)勢

該方法可在組織和細胞中進(jìn)行抗原的準確定位，因而可同時(shí)對不同抗原在同一組織或細胞中進(jìn)行定位觀(guān)察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結合的研究，相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高，是定位檢測分析首選方法對病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義，尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。

WB與IHC技術(shù)相比，定量可能更加準確

當然WB也可定性和定位(通過(guò)提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位)，但敏感性遠遠低于IHC。

ELISA與免疫組化技術(shù)相比，定量最準確，是分泌性蛋白檢測首選方法之一。

尤其對于微定量分析多個(gè)樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少，結果精確。IHC針對性比較強，而且一般是以組織或者細胞為樣本，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽(yáng)性或者陰性，一般不用于定量檢測。

閱讀：  2016-12-19 09:34:52