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親和層析原理及應用介紹

親和層析是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力,從而達到分離目的的一類(lèi)特殊層析技術(shù)。
 
具有專(zhuān)一親和力的生物分子對主要有:抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素(或藥物)與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等??捎H和的一對分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑,當含有混合組份的樣品通過(guò)此固定相時(shí),只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì),才能被固定相吸附結合,其它沒(méi)有親和力的無(wú)關(guān)組份就隨流動(dòng)相流出,然后改變流動(dòng)組成份,將結合的親和物洗脫下來(lái)。親和層析中所用的載體稱(chēng)為基質(zhì),與基質(zhì)共價(jià)連接的化合物稱(chēng)配基。
 
親和層析純化過(guò)程簡(jiǎn)單、迅速,且分離效率高。對分離含量極少又不穩定的活性物質(zhì)尤為有效。但本法必須針對某一分離對象,制備專(zhuān)一的配基和尋求層析的穩定條件。
 
使用親和層析的方法可以簡(jiǎn)便、快速、高效地將目標蛋白從雜蛋白溶液中分離純化出來(lái),親和層析技術(shù)已成為廣泛應用的一種蛋白分離技術(shù),或可為客戶(hù)提供的抗體或抗血清制備親和層析柱。
 
親和層析可用于:1.純化生物大分子2.稀溶液的濃縮3.不穩定蛋白質(zhì)的貯藏4.從純化的分子中除去殘余的污染物5.用免疫吸附劑吸附純化對此尚無(wú)互補配體的生物大分子6.分離核酸是親和層析應用的一個(gè)重要方面。
 


閱讀:  2016-07-04 09:21:42  

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