1.不同的細胞，喜歡的環(huán)境是不一樣的。

這個(gè)不僅僅是說(shuō)培養基的不同，還有就是細胞生長(cháng)的空間密度問(wèn)題。

有一些細胞是數量多一點(diǎn)比較好生長(cháng)，生長(cháng)狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長(cháng)速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數量少一點(diǎn)細胞狀態(tài)會(huì )生長(cháng)的比較好，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞，生長(cháng)速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時(shí)就應該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會(huì )比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長(cháng)，而堆與堆之間是有空間的。如果長(cháng)成相連在一起的一滿(mǎn)片的時(shí)候，細胞形態(tài)基本上就會(huì )差了，老化的會(huì )比較多，對后期實(shí)驗結果是不好的。所以在養細胞的時(shí)候應該摸索該細胞喜歡的生長(cháng)空間密度問(wèn)題。

2.對于有些人總是會(huì )遇到養的細胞形態(tài)怎么都不好的問(wèn)題。
這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作：

首先，倒掉舊的培養基，加入3ml新的培養基（有無(wú)血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養基，進(jìn)行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著(zhù)瓶底過(guò)一遍，然后吸走。這時(shí)侯再開(kāi)始正式的消化、吹打。（巨噬細胞我們只吹打，不消化的）
其次，把吹打下來(lái)的細胞懸液加入到新的培養瓶?jì)?，培養瓶事先加入培養基，放入培養箱內培養，按時(shí)間點(diǎn)觀(guān)察細胞貼壁情況。10分鐘觀(guān)察一次，20分鐘，30分鐘觀(guān)察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養基，加入3ml新培養基再輕輕洗一次。然后加入完全培養基培養。后續觀(guān)察細胞生長(cháng)情況以及形態(tài)。我稱(chēng)之為“二傳”。呵呵。
如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意，結合細胞喜歡的生長(cháng)情況。喜歡多一點(diǎn)數量長(cháng)得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。這個(gè)是我師兄發(fā)明的，謝謝他了。這個(gè)方法真的很好用！

3.關(guān)于培養瓶?jì)燃尤肱囵B基的量的問(wèn)題。

這個(gè)是要靠自己去摸索你所養的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養基少一點(diǎn)相反細胞形態(tài)會(huì )長(cháng)得比較好。（可能也是競爭很大，有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。）對于生長(cháng)速度快的細胞，易生長(cháng)的細胞加少一點(diǎn)培養基細胞形態(tài)會(huì )更好。但是要注意換液掌握。

4.關(guān)于選擇培養瓶的問(wèn)題。
個(gè)人發(fā)現生長(cháng)速度快的細胞在玻璃瓶?jì)壬L(cháng)的狀態(tài)會(huì )比一次性塑料瓶相對好一些。而對于同一種細胞，在其生長(cháng)旺盛快速的時(shí)期在玻璃瓶?jì)鹊纳L(cháng)狀態(tài)也比塑料瓶?jì)群?。這可能是因為塑料瓶比玻璃瓶更容易貼壁。生長(cháng)速度快的細胞在塑料瓶這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長(cháng)得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長(cháng)速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài)，塑料瓶比玻璃瓶會(huì )好，對于生長(cháng)速度慢的細胞，玻璃瓶則會(huì )更好。同樣，對于同一種細胞，在其生長(cháng)速度慢的時(shí)候，塑料瓶會(huì )好一點(diǎn)，比如剛剛復蘇的時(shí)候，或者原代培養的時(shí)候。而在其生長(cháng)旺盛的時(shí)候，玻璃瓶則相對會(huì )好一點(diǎn)。

閱讀：  2016-04-25 14:29:54