做cell biology實(shí)驗，細胞鋪板大概是最常見(jiàn)的一個(gè)實(shí)驗了。但是有很多人不是很得要領(lǐng)，鋪得不是均勻： 要么中間密周?chē)?，要么周?chē)苤虚g禿頂。以下是我的一些技巧，希望可以幫助到大家。
1.
一般96孔板我每孔是加100微升細胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后，將未加的細胞懸液混一下再，繼續加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強或次數太多會(huì )導致細胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉（逆時(shí)針效果不好），依次敲擊剩余三個(gè)邊，靜置約5分鐘，放入37度培養箱。
6孔板12孔板或24孔板，我均采用將第一個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養基，晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔一次類(lèi)推，這樣整個(gè)孔底都是濕潤的，細胞懸液會(huì )平鋪在整個(gè)孔底，加細胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細胞多，而加在周邊晃勻后周邊細胞多中間少的現象，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒(méi)有96孔板好掌握，效果沒(méi)有96孔板好，所以我放棄改用浸潤孔底的方法。
2.
細胞懸液加完后，將細胞培養板抬高，對著(zhù)燈光，從底部往上看，看細胞有沒(méi)有抱團。然后從底部敲擊，使之分散。
3.
如果實(shí)驗室有平板振蕩器的話(huà)，我建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下，效果不錯，就是振幅小，頻率高的那種。
4. 細胞要盡量打散，大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后，要充分懸??！還有轉移到六孔板后，是要晃得！晃的時(shí)候最好不要讓那個(gè)細胞液轉圈，不然細胞就全被帶到中間去了，就會(huì )不均勻！
5.
一瓶細胞長(cháng)滿(mǎn)后，正常處理，在培養瓶里吹勻，然后鋪6孔板，每孔2毫升，鋪完之后不用觀(guān)察直接用酒精棉擦拭，然后放到培養箱里，輕微的左三圈右三圈 前三圈 后三圈?；旧?4小時(shí)之后觀(guān)察 每孔的細胞都會(huì )很均勻。
6.
計算好所需要的全部液體量和細胞量，混勻后，加到六孔板里，六孔板按橫8字型晃，顯微鏡下觀(guān)察，如果不均勻，按上述方法再晃。如果細胞未計數直接種的話(huà)，在種六孔板的過(guò)程中，隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子，瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉圈。
7.
放在水平板面上先上下移動(dòng)，再左右移動(dòng)，每個(gè)方向５到６次，但關(guān)鍵的是搖完后最好直接放入培養箱中，不要再做過(guò)多的運動(dòng)，例如放到鏡下去看，否則很容易就又聚到中間去了
閱讀： 2016-04-25 14:27:28
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