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支原體簡(jiǎn)介
支原體(mycoplasma):又稱(chēng)霉形體,為目前發(fā)現的最小的最簡(jiǎn)單的原核生物。支原體
細胞中唯一可見(jiàn)的細胞器是核糖體(支原體是原核細胞,原核細胞的細胞器只有核糖體)。
支原體是在 1898 年發(fā)現的,又稱(chēng)人形支原體,是一種簡(jiǎn)單的原核生物。其大小介于細菌和
病毒之間。結構也比較簡(jiǎn)單,多數呈球形,沒(méi)有細胞壁,只有三層結構的細胞膜,故具有較
大的可變性。支原體的大小為 0.2~0.3um,可通過(guò)濾菌器,常給細胞培養工作帶來(lái)污染的麻
煩。菌落?。ㄖ睆?0.1~1.0mm),在固體培養基表面呈特有的"油煎蛋"狀。無(wú)細胞壁,不能
維持固定的形態(tài)而呈現多形性,對滲透壓敏感,對抑制細胞壁合成的抗生素不敏感。
支原體污染的來(lái)源
包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養基的
污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實(shí)驗器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細胞的原始組織
或器官的污染。
支原體污染對細胞的影響
1、影響細胞的生長(cháng)狀態(tài)及形態(tài)
支原體可使培液中支持細胞生長(cháng)的營(yíng)養物質(zhì)含量減少,造成細胞生長(cháng)緩慢甚至停止;細
胞狀態(tài)變差,生長(cháng)變慢,在顯微鏡下觀(guān)察可能會(huì )有小黑點(diǎn),但培養基一般不發(fā)生渾濁。會(huì )導
致細胞微管解聚,引起細胞一系列病變,表現為細胞收縮、貼壁細胞脫落、裂解等。細胞傳
代以后就出現細胞間黑點(diǎn),細胞空泡化,很多類(lèi)似凋亡、壞死的細胞,最終細胞漂浮,完全
死亡。
2.影響細胞的代謝和功能
(1)培液中的精氨酸被支原體大量消耗,引起細胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA 的合成
障礙;
(2)支原體活動(dòng)使培養基成分發(fā)生改變(如發(fā)酵型支原體降解糖類(lèi)產(chǎn)生酸性物質(zhì)),影響
細胞代謝;
(3)支原體吸附在細胞表面,破壞細胞膜的完整性,影響細胞信號傳遞;
(4)支原體消耗細胞的核苷庫—染色體異常。
3、其他
此外,支原體污染還會(huì )影響一些病毒在細胞中的產(chǎn)量、使惡性細胞致癌能力下降、影響
淋巴細胞分化等。
支原體污染的檢測方法
1、培養法
原理是利用營(yíng)養豐富的培養基,直接對待檢細胞、血清等進(jìn)行支原體培養。
缺點(diǎn):靈敏度低,試驗周期長(cháng),不能檢測到種且不適用于檢測所有支原體。
2、DNA 熒光染色法
利用熒光 Hoechst33258標記細胞和支原體 DNA,在紫外光(波長(cháng)為 630 nm)激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光,利用熒光顯微鏡觀(guān)察支原體是否存在。
缺點(diǎn):有時(shí)易出現假陰性和假陽(yáng)性
3、聚合酶鏈反應(PCR)法
通過(guò)擴增被檢測標本中的支原體 DNA ,再進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。電泳完畢,將電泳膠在
紫外投射儀下觀(guān)察,根據標準分子量及陽(yáng)性對照、內對照條帶,觀(guān)察待測樣品中是否有陽(yáng)性
條帶
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閱讀: 2016-04-15 11:31:20