服務(wù)熱線(xiàn)：
pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶融合，因此可以通過(guò)谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進(jìn)行純化。GSTs是一類(lèi)以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過(guò)形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對底物的親和力是亞毫摩爾級的，因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹(shù)脂對GST及其融合蛋白的純化效率很高?？梢杂煤坞x谷胱甘肽的緩沖液洗脫結合GST融合蛋白。樹(shù)脂用3mol/LNaCl的緩沖液再生。谷胱甘肽瓊脂糖對GST融合蛋白的結合能力很強（每毫升柱床體積的樹(shù)脂能結合8毫克融合蛋白）。
有效期：1年
別名：GST標簽純化樹(shù)脂
英文名稱(chēng)：GSTResin
儲存條件：2-8℃，有效期1年
單位：瓶
特性：
粒度：45-165?m
流速：75cm/h
工作PH：4-10
耐壓：0.3Mpa
載量：＞5mg谷胱甘肽S-轉移酶
使用說(shuō)明：
谷胱甘肽樹(shù)脂的處理：
1. 輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹(shù)脂的容器，將樹(shù)脂混成勻漿。
2. 取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細菌培養物大約需要2mL勻漿）。
3. 4℃，500g離心5分鐘，小心去掉上清。
4. 在樹(shù)脂中加入10倍柱床體積預冷的PBS，顛倒數次混勻，4℃，500g離心5分鐘，小心去掉上清。
5. 每毫升樹(shù)脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
制備細胞抽提物：
6. 每100毫升培養物的細胞沉淀重懸于4mLPBS緩沖液中。
7. 加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
8. 用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強行注入黏稠的細胞裂解物中，劇烈振動(dòng)數次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5ug/mL,4℃振動(dòng)溫育10分鐘，4℃，3000g離心30分鐘，去除不溶性細胞碎片，上清轉移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
純化融合蛋白：
9. 細胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹(shù)脂勻漿混和，每100毫升細菌培養物加2mL樹(shù)脂，于室溫輕搖30min。
10. 混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
11. 沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數次混勻，洗去未與樹(shù)脂結合的蛋白。
12. 4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
13. 重復步驟11和12兩次。
14. 結合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
15. 沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動(dòng)10min，洗脫樹(shù)脂上結合的蛋白。
16. 4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
17. 重復步驟a和b兩次，合并3次上清。
蛋白酶解從結合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18. 在結合了融合蛋白的樹(shù)脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據融合蛋白中的位點(diǎn)選擇），每mL樹(shù)脂加入50單位溶于1mLPBS的蛋白酶。顛倒離心管數次混勻，室溫下振蕩2—16小時(shí)。用小規模實(shí)驗確定精確時(shí)間。
19. 4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結合在樹(shù)脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
20. 10%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質(zhì)組成。試劑配制：谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/LTris-Cl(pH8.0)
產(chǎn)品貨號：S1010
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