產(chǎn)品規格:
10塊/份
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
RealPAGE Tricine蛋白預制膠可以用來(lái)檢測1-40 kd的多肽大小。包裝里含有電泳緩沖液和上樣緩沖液,方便使用。蛋白預制膠采用獨特配方,不含SDS,可以進(jìn)行非變性電泳(需要去除電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑)。
預制膠玻璃板尺寸10×8.2 cm,凝膠尺寸8.3×7.5 cm,凝膠厚度1.1 mm,梳子12齒,最大上樣體積30 μl,兼容伯樂(lè )電泳槽。
該產(chǎn)品配套膠板和緩沖液可以進(jìn)行10板電泳。
● 運輸和貯存:
本產(chǎn)品常溫運輸;4-8℃貯存,不能冷凍;有效期3個(gè)月。
● 使用說(shuō)明:
一. 安裝凝膠:
拆開(kāi)預制膠包裝,將預制膠安裝在合適的電泳槽中。
二. 電泳緩沖液配制:
10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:
將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat:CB010P)置于一干凈的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。用前按照下表稀釋10倍配成1×TTS緩沖液。
1×TTS配制量 500 ml | |
10×TTS | 50 ml |
超純水 | 450 ml |
注:伯樂(lè )Mini III電泳槽一次電泳使用500 ml 1×TTS緩沖液。
三. 樣品處理:
待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat:TP050]等體積混合,75℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液,根據說(shuō)明書(shū)上樣(預染Marker不能加熱處理,非預染Marker上樣前一般要75℃處理5-10分鐘)。
四. 電泳:
4.1 將電泳槽的內槽加滿(mǎn)1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品(已經(jīng)過(guò)處理)加入點(diǎn)樣孔,穩壓電泳(表二),至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2.5-3個(gè)小時(shí)。
表二 多肽電泳條件
恒電壓 | 150V |
起始電流 | 60-75mA/板膠 |
結束電流 | 15-25mA/板膠 |
電泳時(shí)間 | 2.5-3小時(shí) |
4.2 拆膠:
電泳結束后,取出凝膠,用刀片沿著(zhù)短玻璃板和邊條的縫隙劃開(kāi)兩側粘合膠,即可打開(kāi)玻璃板。取膠時(shí),需在凝膠和玻璃邊條之間,沿著(zhù)玻璃邊條輕劃一刀,防止發(fā)生粘連使凝膠破碎。
四.染色:(使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202)
4.1 用前必讀:
4.1.1 使用前如發(fā)現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。
4.1.2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0 mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。
4.2 使用方法:
4.2.1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適),條帶1-2分鐘即可見(jiàn)。
4.2.2. 搖床上常溫搖動(dòng)10-15分鐘。
4.2.3. 觀(guān)察結果。
4.4注意事項:
4.4.1 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長(cháng)染色的時(shí)間。
4.4.2 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無(wú)必要。
4.4.3 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性會(huì )有輕微下降,請延長(cháng)染色時(shí)間。
4.4.4 本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,常溫密封保存。
五. 轉膜:
多肽轉膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜(用前用甲醇處理潤濕)或0.22 μm NC膜。
5.1 半干轉:
半干轉轉膜緩沖液:
48 mM Tris,39 mM Glycine,0.0375 %SDS,20% Methanol,pH~9.2
轉膜條件:恒流200 mA 15-20 min。
5.2 濕轉:
濕轉轉膜緩沖液:
25 mM Tris,192 mM Glycine,0.1%SDS,20% Methanol,pH~8.3
轉膜條件:恒流400 mA 40-60 min
六. 緩沖液配方:
10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液
[1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿121.14g
Tricine 179.2g
SDS 10 g
用ddH2O溶解,定容至1000 ml (不要調pH)。
貯存:4℃
注:使用前稀釋10倍使用
2×Tricine多肽上樣緩沖液(10 ml)
1ml 1MTris-HCl pH6.8
2.4 ml 甘油
0.8 g SDS
0.31gDTT(或者400 μl β-巰基乙醇)
2 mg 考馬斯亮藍G-250
用滅菌ddH2O定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存備用
產(chǎn)品貨號:gl6122-1020