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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從生物樣品（質(zhì)膜，胞漿等）中分離分子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋白質(zhì)復合物的電泳技術(shù)。其原理是用溫和去污劑(如 DDM，digitonin)將蛋白復合體從細胞膜中以近似天然的狀態(tài)分離出來(lái)，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白結合而使其帶負電荷，根據蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖液中不加入任何染料，電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態(tài)，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在，使蛋白都覆蓋上負電荷，可以分離堿性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只適合于酸性蛋白（pI＜7）的分離。

本產(chǎn)品可以用于分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白復合體，樣品可以來(lái)于胞漿、細胞總裂解液、細胞膜、線(xiàn)粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實(shí)驗，也可直接用于電洗脫制備蛋白。

● 運輸和貯存：

本產(chǎn)品常溫運輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷凍；有效期6個(gè)月。

● 使用說(shuō)明：

一. 樣品制備：

   該試劑盒不含樣品制備的相關(guān)試劑。

二. 電泳：

2.1 拆開(kāi)預制膠包裝，將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

2.2 準備電泳緩沖液：

10×BN/CN電泳緩沖液稀釋10倍即配成1×BN/CN電泳緩沖液。

2.2.1 CN-PAGE電泳：

內槽緩沖液（陰極緩沖液）和外槽緩沖液（陽(yáng)極緩沖液）均直接使用1×BN/CN電泳緩沖液進(jìn)行電泳。

2.2.2 BN-PAGE電泳：

外槽緩沖液使用1×BN/CN電泳緩沖液，內槽緩沖液按照下表配制：

2.3準備樣品：

2.3.1 CN-PAGE電泳：

2.3.2 BN-PAGE電泳：

樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。

例如樣品中DDM終濃度為1%，則需要G-250終濃度為0.25%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

2.4電泳過(guò)程；

2.4.1 CN-PAGE電泳：

電泳內外槽均使用1×BN/CN電泳緩沖液。在電泳槽的內槽內加入1×BN/CN電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過(guò)加樣孔)，輕輕撥出預制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN電泳緩沖液，冰浴電泳，。

電泳條件（一板膠）

2.4.2 BN-PAGE電泳：

BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內槽開(kāi)始電泳使用的是1×藍色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時(shí)，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續后續電泳，因為過(guò)多染料會(huì )影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續的轉膜實(shí)驗。

BN-PAGE電泳條件（一板膠）

三. 緩沖液配方：

3.1  10×BN/CN電泳緩沖液

終濃度  組份    500 ml

0.15 M  Bis-Tris   15.7 克

0.5 M  Tricine    44.8 克

超純水 定容至500 ml

徹底溶解，測定pH應為7.0左右，不要調節pH。

3.2  0.4% G-250 染料（電泳用）

    100ml：0.4克考馬斯亮藍G-250，溶于100 ml超純水中，漩渦攪拌2-3小時(shí)，至染料徹底溶解，4℃貯存。

3.3  4×BN/CN 蛋白上樣緩沖液

組成：200mM Bis-Tris，40%甘油，200 mM NaCl，0.04%麗春紅S  pH7.0

3.4  5% G-250 染料（上樣用）

    組成： 5% G-250，500 mM 6-氨基己酸

    50 ml：稱(chēng)取2.5克考馬斯亮藍G-250，3.28克6-氨基己酸溶于50 ml超純水中，漩渦攪拌2-3小時(shí)，至染料徹底溶解，4溫度貯存。