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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

RealPAGE Tricine蛋白預制膠可以用來(lái)檢測1-40 kd的多肽大小。包裝里含有電泳緩沖液和上樣緩沖液，方便使用。蛋白預制膠采用獨特配方，不含SDS，可以進(jìn)行非變性電泳（需要去除電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑）。

預制膠玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝膠尺寸8.3×7.5 cm，凝膠厚度1.1 mm，梳子12齒，最大上樣體積30 μl，兼容伯樂(lè )電泳槽。

該產(chǎn)品配套膠板和緩沖液可以進(jìn)行10板電泳。

● 運輸和貯存：

本產(chǎn)品常溫運輸；4-8℃貯存，不能冷凍；有效期3個(gè)月。

● 使用說(shuō)明：

一. 安裝凝膠：

拆開(kāi)預制膠包裝，將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

二. 電泳緩沖液配制：

10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制：

將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat：CB010P）置于一干凈的一升燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。用前按照下表稀釋10倍配成1×TTS緩沖液。

注：伯樂(lè )Mini III電泳槽一次電泳使用500 ml 1×TTS緩沖液。

三. 樣品處理：

      待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat：TP050]等體積混合，75℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液，根據說(shuō)明書(shū)上樣（預染Marker不能加熱處理，非預染Marker上樣前一般要75℃處理5-10分鐘）。

四. 電泳：

4.1 將電泳槽的內槽加滿(mǎn)1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過(guò)處理）加入點(diǎn)樣孔，穩壓電泳（表二），至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2.5-3個(gè)小時(shí)。

表二 多肽電泳條件

4.2 拆膠：

      電泳結束后，取出凝膠，用刀片沿著(zhù)短玻璃板和邊條的縫隙劃開(kāi)兩側粘合膠，即可打開(kāi)玻璃板。取膠時(shí)，需在凝膠和玻璃邊條之間，沿著(zhù)玻璃邊條輕劃一刀，防止發(fā)生粘連使凝膠破碎。

四.染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat：RTD6202）

4.1 用前必讀：

4.1.1 使用前如發(fā)現瓶中有少許沉淀，請混勻后使用。

4.1.2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝膠染色程序。

4.2 使用方法：

4.2.1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量染色液（以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適），條帶1-2分鐘即可見(jiàn)。

4.2.2. 搖床上常溫搖動(dòng)10-15分鐘。

4.2.3. 觀(guān)察結果。

4.4注意事項：

4.4.1 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝膠，如果使用更大面積或更厚的凝膠，請加入更多的染色液并延長(cháng)染色的時(shí)間。

4.4.2 常規染色所需的漂洗，固定，脫色步驟都無(wú)必要。

4.4.3 本染色液可以重復利用1-2次，敏感性會(huì )有輕微下降，請延長(cháng)染色時(shí)間。

4.4.4 本染色液有輕微腐蝕性，請帶手套操作。使用后，請蓋好瓶蓋，常溫密封保存。

五. 轉膜：

多肽轉膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇處理潤濕）或0.22 μm NC膜。

5.1 半干轉：

半干轉轉膜緩沖液：

48 mM Tris,39 mM Glycine,0.0375 %SDS，20% Methanol,pH~9.2

轉膜條件：恒流200 mA 15-20 min。

5.2 濕轉：

濕轉轉膜緩沖液：

25 mM Tris,192 mM Glycine,0.1%SDS，20% Methanol,pH~8.3

轉膜條件：恒流400 mA  40-60 min

六. 緩沖液配方：

10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液

[1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

Tris堿121.14g

Tricine 179.2g

SDS 10 g

用ddH₂O溶解，定容至1000 ml (不要調pH)。

貯存：4℃

注：使用前稀釋10倍使用

2×Tricine多肽上樣緩沖液（10 ml）

1ml 1MTris-HCl pH6.8

2.4 ml 甘油

0.8 g  SDS

0.31gDTT（或者400 μl β-巰基乙醇）

2 mg 考馬斯亮藍G-250

用滅菌ddH₂O定容至10ml

混勻分裝-20℃貯存備用