氟蟲(chóng)腈酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
其他種類(lèi)試劑盒本試劑盒僅供研究使用。
本試劑盒用于飼料、魚(yú)、蝦和肉類(lèi)組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中氟蟲(chóng)腈殘留的定量檢測。
本試劑盒采用競爭 ELISA 方法,在微孔板包被有氟蟲(chóng)腈偶聯(lián)抗原,加入氟蟲(chóng)腈標準品或樣品,游離氟蟲(chóng)腈與微孔條上預包被的氟蟲(chóng)腈偶聯(lián)抗原互相競爭抗氟蟲(chóng)腈抗體酶標記物, 用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標儀在 450nm 波長(cháng)下進(jìn)行檢測, 吸光值與樣品中氟蟲(chóng)腈含量成反比,通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中氟蟲(chóng)腈的含量。
3.1 預包被的氟蟲(chóng)腈偶聯(lián)抗原的可拆酶標板:1 塊(12 孔×8 條)。
3.2 氟蟲(chóng)腈標準品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb。
3.3 抗氟蟲(chóng)腈抗體酶結合物:1 瓶(6ml)。
3.4 顯色液 A:1 瓶(6ml)。
3.5 顯色液 B:1 瓶(6ml)。
3.6 終止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。
3.7 樣本稀釋液:1 瓶(10×, 6ml),用于樣品稀釋用。
3.8 濃縮洗滌液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9 說(shuō)明書(shū)一份。
4.1 設備
4.1.1 波長(cháng)450nm酶標儀。
4.1.2 粉碎機。
4.1.3 量筒。
4.1.4 振蕩器。
4.1.5 漏斗。
4.1.6 Whatman No 1或相當的濾紙。4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1 去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)。
6.2 不要使用過(guò)期試劑盒。
6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。
6.4 標準品中含有氟蟲(chóng)腈,使用時(shí)應特別注意,操作時(shí)應帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì )影響試驗結果。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì )影響 實(shí)驗結果。
6.8 稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì )影響實(shí)驗結果
6.9 混合試劑時(shí)應避免起泡。
7.1 氟蟲(chóng)腈標準品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb
7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
7.3 顯色劑:已備用,避免光線(xiàn)直照
7.4 反應終止液:已備用
8 樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴格按說(shuō)明書(shū)操作,提取過(guò)程中應準確稀釋?zhuān)駝t會(huì )出現結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
8.1 取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2 強力振蕩3分鐘
8.3 用Whatman No 1濾紙過(guò)濾
8.4 取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應孔中(樣本稀釋倍數為2)
9.1 實(shí)驗須知
9.1.1 實(shí)驗開(kāi)始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)?;販刂潦?/span>溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用精確的微量移液器
9.1.5 操作一旦開(kāi)始,請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染,每個(gè)標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時(shí)請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預先進(jìn)行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測
9.2.2 取所需數量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
9.2.4 在B0孔中加入50μl 0.0ppb標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗氟蟲(chóng)腈抗體酶結合物
9.2.8 輕輕晃動(dòng)反應板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min (溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)
9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液 體。
9.4 反應
9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應板使之徹底混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3 每孔中加入50μl終止液,混勻
9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。
10.1 定量分析
10.1.1 所獲得的每個(gè)濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個(gè)標準(0標準) 的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0ppb標準溶液的平均吸光度值
10.1.2 以氟蟲(chóng)腈濃度的對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線(xiàn)圖。根據樣品百分 吸光度值,可從曲線(xiàn)上得到對應點(diǎn)的橫坐標,即為氟蟲(chóng)腈濃度的對數值,求得反對數即為測定液中氟蟲(chóng)腈濃度C(ppb)
10.1.3 由于樣品經(jīng)過(guò)了預先稀釋?zhuān)虼烁鶕藴是€(xiàn)所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。
10.2 半定量測定
10.1.1 目測半定量測定:首先選擇一個(gè)適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
10.1.2 儀器半定量測定:首先選擇一個(gè)適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
物質(zhì) 交叉反應氟蟲(chóng)腈 100%
本試劑盒檢測下限為0.05ppb B0吸光度最佳值應大于1.0
試劑盒吸光度板內誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說(shuō)明書(shū)提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。 13
試劑盒提供的標準曲線(xiàn)范圍為0.1ppb~8.1ppb。
本試劑盒檢測為陽(yáng)性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
產(chǎn)品貨號:98045