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1 原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的沙丁胺醇（Salbutamol，Sal），試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時(shí)，加入標準品或樣品溶液，樣本中的沙丁胺醇和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗沙丁胺醇抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含沙丁胺醇含量成負相關(guān)，與標準曲線(xiàn)比較即可得出樣本中沙丁胺醇的殘留量。
2 技術(shù)指標
2.1 試劑盒靈敏度：0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應模式：25℃，30min～15min。
2.3 檢測下限：
尿液樣本………………………………………0.1ppb
組織樣本………………………………………0.1ppb
飼料樣本………………………………………1ppb 
3 試劑盒組成
酶標板…………………………………96孔
標準液（綠蓋）：各1ml
0ppb，0.1ppb，0.3ppb，0.9ppb，2.7ppb，8.1ppb
高標準液（紅蓋）：100ppb……………1ml
酶標記物 (紅蓋)…………………………7ml
抗體工作液 (藍蓋)………………………10ml
底物液A (白蓋)…………………………7ml
底物液B(黑蓋)……………………………7ml
終止液(黃蓋)……………………………7ml
20X濃縮洗滌液(透明蓋)………………40 ml
2X復溶液(黃蓋)…………………………50 ml
說(shuō)明書(shū)………………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?0?l-200?l，100?l-1000?l、多道300?l
4.3 試劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、濃HCl、乙腈、異丙醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
    實(shí)驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。實(shí)驗之前須檢查各種實(shí)驗器具是否干凈，必須使用潔凈實(shí)驗器具，以避免污染干擾實(shí)驗結果。
5.2 配液：
配液1：1M鹽酸溶液
    稱(chēng)取8.6ml濃HCl加去離子水至100ml。
配液2：1M NaOH 溶液
    稱(chēng)取4g NaOH加去離子水至100ml。
配液3：復溶液
    用去離子水將2×復溶液按1:1 體積比進(jìn)行稀釋?zhuān)糜跇颖镜膹腿?，復溶液?℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
5.3 樣本前處理步驟：
實(shí)驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗結果。
5.3.1 尿樣本處理方法
    直接取50?l清亮尿樣進(jìn)行測定（渾濁尿樣需要過(guò)濾或經(jīng)4000r/min離心5min，以得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。
    尿樣本稀釋倍數：1    檢測下限：0.1ppb
5.3.2 組織樣本處理方法
1） 稱(chēng)取均質(zhì)后的組織樣本2±0.05g ，加入1ml復溶液，振蕩混勻后加入4ml乙腈，振蕩混勻后加入1ml異丙醇，充分振蕩5min，室溫4000r/min以上離心10min；
2） 取上清液3ml，加入50ul 1M NaOH，加入7ml乙酸乙酯，充分振蕩5min，室溫4000r/min以上離心10min，取全部上清在56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全干燥；
3） 加入1ml 復溶液溶解干燥的殘留物，加入1ml正己烷混合30s ；15℃ 4000轉/分 以上離心5min。
4） 取50?l下層液進(jìn)行分析。
組織樣本稀釋倍數：1    檢測下限：0.1ppb
5.3.3 飼料樣本處理方法：
1）稱(chēng)取均質(zhì)后的飼料樣品1.0±0.05g，加入10ml甲醇，再加入5g無(wú)水硫酸鈉，振蕩2min；室溫 4000r/min以上離心10min；
2）吸出離心后的上清液1ml，于56℃氮氣吹干，用1 ml復溶液溶解干燥的殘留物，再加入1mL正己烷混合30s；室溫4000r/min以上離心5min。
3）取50?l下層進(jìn)行分析。
    樣本稀釋倍數：10    檢測下限：1ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì )有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
實(shí)驗開(kāi)始前需：將20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋成工作洗滌液。
6.1 編    號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個(gè)樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應：加標準品或樣本50?l/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50?l/孔，再加入50?l/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應30分鐘。
6.3 洗    滌：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內液體甩干，用工作洗滌液250?l/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50?l，再加底物液B 50?l，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終    止：每孔加入終止液50?l，輕輕振蕩混勻，終止反應。
6.6 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長(cháng)450/630nm）。測定應終止反應后在10分鐘內完成。
7 結果分析
7.1 百分吸光率的計算
    標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標準（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即
 百分吸光度值（%）＝    A    ×100%
    A0    
A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值
7.2 標準曲線(xiàn)的繪制與計算
    以標準品百分吸光率為縱坐標，對應的標準品濃度（ppb）的對數為橫坐標，繪制標準品的半對數曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線(xiàn)中，從標準曲線(xiàn)上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。