服務(wù)熱線(xiàn)：
【測定原理】 本試劑盒采用間接競爭ELISA法檢測尿樣和組織等樣本中的萊克多巴胺，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應的原理來(lái)進(jìn)行，樣本中的克倫特羅和微孔條上預包被偶聯(lián)抗原競爭標記有辣根過(guò)氧化酶的抗萊克多巴胺抗體，通過(guò)洗滌后，用TMB底物顯色，樣品中的萊克多巴胺含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線(xiàn)比較即可得出萊克多巴胺含量。 【試劑盒技術(shù)指標】 規 格：96孔/盒 靈 敏 度： 0.1ppb 檢測時(shí)間： 45min 樣本檢測下限： 尿 樣 ………………………………… 0.1ppb 組 織（處理法一）…………………… 0.4ppb 肉樣本（處理法二）…………………… 0.1ppb 肝樣本（處理法二）…………………… 0.2ppb 飼 料 …… …………………………… 1ppb 交叉反應率： 萊克多巴胺（Ractopamine）……………… 100% 克倫特羅（Clenbuterol）………………… <0.1% 沙丁胺醇（Salbutamol ）………………… <0.1% 多巴酚丁胺（dobutamine）……………… <0.1% 樣本回收率： 尿 樣 ……………………… 95%±10% 組 織 ……………………… 85%±15% 飼 料 ……………………… 85%±15% 【試劑盒組成】 1、 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔） 2、 （Clenbuterol標準溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3、 酶標記抗體工作液 10ml………………綠色帽 4、 底物A液 7ml ……………………白色帽 5、 底物B液 7ml ……………………黑色帽 6、 終 止 液 7ml ……………………黃色帽 7、 20X濃縮洗滌液40 ml ………………透明帽 【 所用儀器、試劑】 具備的儀器：微孔酶標儀、氮氣吹干裝置、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管 微量移液器：?jiǎn)蔚?0?l-200?l、100?l-1000?l、多道 250?l 試 劑： 乙腈、甲醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉 【樣本前處理步驟】 樣本處理前須知 處理任何樣本時(shí)，都必須注意： （a）實(shí)驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。 （c）實(shí)驗之前須檢查各種實(shí)驗器具是否干凈，必要時(shí)可對實(shí)驗器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗結果。 （a）尿樣本的處理方法 取20?l清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。 樣本稀釋倍數：1 （b）組織樣本的處理方法一 1、 稱(chēng)2±0.05g組織，加入6ml去離子水，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min。 2、 取20?l上清液進(jìn)行分析。 樣本稀釋倍數：4 （c） 組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法二 1、 稱(chēng)取均勻后的組織樣本2±0.05g ，加入8ml乙腈溶液，充分振蕩2min。4000r/min以上，15℃離心10min； 2、 取上清液5ml，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全干燥； 肉樣本： 加入1ml 去離子水混合振蕩30s，取20?l用于分析。 肉樣本稀釋倍數：1 肝樣本： 加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 去離子水混合振蕩30s，4000r/min以上，15℃離心5min，去除上層；取50?l下層 與50?l去離子水混勻；取20?l用于分析。 肝樣本稀釋倍數：2 （d）飼料樣本 1. 稱(chēng)1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml甲醇，再加入5g無(wú)水硫酸鈉，放振蕩器上振蕩2min；15℃ 4000r/min以上離心10min； 2. 吸出離心后的上清液1ml，于56℃氮氣吹干，用1 ml 去離子水溶解干燥的殘留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上離心5min。 3. 取20?l下層進(jìn)行分析。 樣本稀釋倍數：10 【酶標免疫分析程序】 測定前應須知： 1、 使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。 2、 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。 3、 在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。 4、 在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線(xiàn)照射，用蓋板膜封住微孔板。 操作步驟： 1、 將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2、 取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷凍。 3、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個(gè)樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。 4、 加標準品/樣本20?l/孔到各自的微孔中，然后加酶標記抗體80?l/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中反應30min。 5、 小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內液體甩干，用去離子水250?l/孔充分洗滌4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。 6、 顯色：每孔加入底物A液50?l，再加底物B液50?l，輕輕振蕩混勻25℃環(huán)境避光顯色15min。 7、 測定：每孔加入終止液50?l，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處 （建議用雙波長(cháng)450/630nm，檢測在5min內讀完數據）測定每孔OD值。 【結果判定】 結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含萊克多巴胺量成負相關(guān)。 1、用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。例如樣本1的吸光度值為0.311，樣本2的吸光度值為0.715，標準品吸光度值分別是： 0ppb為1.642；0.1ppb為1.200；0.3ppb為0.780；0.9ppb為0.454； 2.7ppb為0.236；8.1ppb為0.142。則樣本1的濃度范圍是0.9ppb-2.7ppb，樣本2的濃度范圍是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中萊克多巴胺的實(shí)際濃度。 2、定量分析 （1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即 百分吸光度值（%）＝ B ×100% 【注意事項】 1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì )導致所有標準的OD值偏低。 2、 在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況，則會(huì )伴隨著(zhù)出現標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。 3、 混合要均勻，否則會(huì )出現重復性不好的現象。 4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。 5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì )引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。 6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標準物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。 7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm<0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。 8、 該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。 【儲存】 原包裝應儲存于2～8℃冷藏，切勿冷凍。 【有效期】 有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見(jiàn)外包裝。 |
溫馨提示：不可用于臨床治療。 |
產(chǎn)品貨號：DR002
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