試驗原理
赭曲霉毒素試劑盒采用競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預包被赭曲霉毒素A抗原,加入樣本及辣根過(guò)氧化物酶標記的赭曲霉毒素A 抗體。樣本或標準溶液中的赭曲霉毒素A與預包被在微孔板上的赭曲霉毒素A抗原競爭結合辣根過(guò)氧化物酶標記的赭曲霉毒素A 抗體,與樣本或標準溶液中的赭曲霉毒素A結合的酶標抗體在洗滌時(shí)被除去,再加入顯色液,讀取吸光度值。樣本的吸光值與其所含殘留物赭曲霉毒素A抗原的含量成負相關(guān)。對照標準曲線(xiàn),即可得出相應殘留物赭曲霉毒素A的含量。
試劑配制
1、將赭曲霉毒素試劑盒取出放置在室溫中,使試劑盒回溫至室溫(20~25℃)。
2、 樣品稀釋液:用去離子水將濃縮樣品稀釋液按1:9體積比進(jìn)行稀釋?zhuān)?份濃縮樣品稀釋液+9份去離子水)。2-8℃保存三個(gè)月。用前混勻。
3、 10倍稀釋洗滌工作液:用去離子水將濃縮洗滌液按1:9體積比進(jìn)行稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+9份去離子水),2-8℃保存三個(gè)月。用前混勻。
操作步驟
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板,將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷凍。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個(gè)樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本:加標準品/樣本50ul/孔到對應的微孔中,再加入酶標物50ul/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應15min。
6、洗板:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內液體甩干,用洗滌工作液300ul/孔,充分洗滌5次,每次間隔30s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。
7、顯色:加入底物液100ul/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應15min。
8、測定:加入終止液50ul/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處測定每孔OD值。
注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(20~25℃)會(huì )導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況,則會(huì )出現標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì )引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存赭曲霉毒素試劑盒于2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8、赭曲霉毒素試劑盒最佳反應溫度為25℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
試劑盒組成
1、96孔酶標板×1塊
2、標準液×6瓶:(1ml/瓶)
0ppb, 1ppb, 2ppb, 6ppb, 18ppb,54ppb
3、酶標物 1瓶 …………………………………………… 6ml
4、顯色液1瓶 ……………………………………… 12ml
5、終止液 ………………………………………6ml
6、濃縮洗滌液 (10×) ………………………………… 40ml
7、濃縮樣品稀釋液(10×) ……………………………… 20ml
8、操作說(shuō)明書(shū)
貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:赭曲霉毒素試劑盒有效期為12個(gè)月。
產(chǎn)品貨號:FG-007