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原理

本試劑盒原理是競爭酶聯(lián)免疫檢測方法，利用甲醇水溶液通過(guò)震蕩萃取從樣品中提取伏馬毒素。然后過(guò)濾萃取液待測。在固相載體微孔板中加入標準和處理的樣品，然后加入伏馬毒素酶標記物，再加入伏馬毒素抗體引發(fā)反應。孵育10分，樣品中的伏馬毒素和酶標伏馬毒素競爭伏馬毒素抗體發(fā)生反應，伏馬毒素抗體和微孔結合。洗板除去沒(méi)有反應的試劑。加入底物顯色劑、無(wú)色的底物轉化為藍色的產(chǎn)物；加入反應終止液后使顏色由藍色變?yōu)辄S色；在450nm波長(cháng)進(jìn)行檢測，樣品中的伏馬毒素濃度與吸收光強度成反比。

試劑盒組成

試劑盒保存在2-8攝氏度。在有效期內都可以使用

1、96孔酶標板：1塊（12×8條）。
2、標準品貯備液（Standard）:5瓶（2ml/瓶），濃度分別為0, 0.3, 1.0,3.0和6.0 μg/mL (ppm) （注意：因為谷物樣品在萃取過(guò)程中1：5倍稀釋?zhuān)瑯藴势穼?shí)際上為設定標準濃度的1/5，所以原樣品的濃度無(wú)需校正）。

3、HRP酶標記物：1瓶（8ml）HRP標記的伏馬毒素酶結合物

4、兔抗伏馬毒素抗體：1瓶（8ml）

5、底物顯色液：1瓶（14ml）

6、終止液：1瓶（14ml 、1N HCl）。

7、使用說(shuō)明書(shū)

操作步驟

注意：標準和樣品做平行可以增加精密度和準確度

1、使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來(lái)使其達到室溫。

2、從鋁箔袋中拿出要求數量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。

3、每個(gè)測試孔都加入50 μL酶結合物。

4、在對應的微孔中加入50μL的標準和樣品，確保吸頭要干凈。

5、每個(gè)測試孔都加入50 μL抗體溶液。

6、孵育10分鐘。

7、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用自來(lái)水加滿(mǎn)微孔然后倒掉，重復四次，總共五次洗板。拍板，去掉殘留的洗液。

8、每個(gè)測試孔加入100μL底物。

9、孵育5分鐘

10、每個(gè)測試孔加入100μL終止液。

11、450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）。

結果分析

1、半定量結果的判定，可根據樣品的吸光度值與標準的吸光度值來(lái)判定，樣品的吸光度值低于某個(gè)標準的吸光度值，則說(shuō)明樣品的伏馬毒素含量大于此標準的濃度，樣品的吸光度值高于某個(gè)標準的吸光度值，則說(shuō)明樣品的伏馬毒素含量小于此標準的濃度。

2、定量結果判定，需要以標準的吸光度值為X軸，標準濃度的對數為Y軸繪制曲線(xiàn)圖，將標準濃度吸光度值的點(diǎn)用直線(xiàn)連接，樣品的吸光度值也位于這條直線(xiàn)上，根據樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相應樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于最小標準的吸光度值或小于最大標準的吸光度值，即可說(shuō)明此樣品中伏馬毒素的含量小于0.3ppm或大于6ppm。

3、 當樣品中伏馬毒素的濃度高于6ppm 時(shí)要稀釋后再測定。