原理
本試劑盒采用競爭一步 ELISA 方法。樣品中的游離嘔吐毒素與酶標記的嘔吐毒素競爭結合酶標板微孔中固相化的嘔吐毒素特異性抗體，通過(guò)洗滌洗掉未結合的酶標記嘔吐毒素，再通過(guò)酶的專(zhuān)一性顯色劑顯色根據顯色的深淺來(lái)判斷樣品中嘔吐毒素。根據競爭性原理，如果樣品中的游離嘔吐毒素量少，則酶標記的嘔吐毒素結合的多，顯色深；反之，則顯色淺。檢測時(shí)設置標準線(xiàn)，通過(guò)標準曲線(xiàn)測定樣品中嘔吐毒素的含量。
3 試劑盒組成
3.1嘔吐毒素酶標板：96孔
3.2 嘔吐毒素標準品：6瓶（1ml/瓶），分別是：
3.3 嘔吐毒素酶結合物：1瓶（6ml）
3.4 濃縮洗滌液：1瓶（10×，50ml）
3.5 底物液A：1瓶（6ml）
3.6 底物液B：1瓶（6ml）
3.7 終止液：1瓶（6ml）
3.8 說(shuō)明書(shū)：1份
3.9 質(zhì)檢報告：1份
4 需要而未提供的材料
4.1 酶標儀（檢測波長(cháng)450nm，參考波長(cháng)630nm）
4.2 微量移液器
4.3 前處理所需試劑及相關(guān)儀器
5 貯存
5.1 試劑盒貯存于2-8℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
5.3 該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)。
6.2 試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（20-25℃）。
6.3 不要使用過(guò)期試劑盒；不同批號試劑盒中的試劑不得混
用；不同標準品、樣品所用吸頭不能混用。
6.4 避免所有試劑接觸皮膚；混合試劑時(shí)應避免起泡。
6.5使用過(guò)的玻璃容器及嘔吐毒素溶液接觸過(guò)的容器最好用 pH7 的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡過(guò)夜。
7 試劑配制
7.1 洗滌工作液：
用去離子水將濃縮洗滌液按1：9體積進(jìn)行稀釋
例如：10ml洗滌工作液=1ml濃縮洗滌液+9ml去離子水
8 樣品處理程序
8.1 取 2g 有代表性的研磨粉末狀樣品，置于干凈離心管或廣口 瓶中，加入 10ml 去離子水，儀器振蕩或手動(dòng)混勻 5 分鐘；
8.2 離心機 5000r/min離心 10 min，取上清液用去離子水按 1:3 稀釋?zhuān)?nbsp;例如：取 200μl 上清液加 600μl 去離子水，待檢。
8.3 用 HCl 或 NaOH 將 8.2 中待檢上清稀釋液調 PH 至中性（若樣本還是渾濁，建議用8000r/min離心5min），按 50μl/孔進(jìn)行加樣分析檢測。
注意：樣品稀釋系數為 20；如果檢測值超出檢測范圍，請用去離子水將 8.3 中待檢上清稀釋液進(jìn)一步稀釋到合適的濃度，并調整樣品稀釋系數。
9 酶免分析步驟
9.1實(shí)驗準備
9.1.1預先進(jìn)行編號，標記標準品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測（每次實(shí)驗都須做標準曲線(xiàn)）；
9.1.2使用前將所有試劑回升至室溫,取所需數量的微孔條，將多余板條用試劑盒提供的自封袋重新密封同時(shí)排除里面空氣，并立即放回2-8℃干燥保存。
9.2分析步驟
9.2.1在標準品孔中加入50?l各標準品溶液，在各樣品孔中加入50?l樣品溶液；
9.2.2在所有孔中加入50?l的嘔吐毒素酶標記物溶液，輕微晃動(dòng)反應板使之徹底混勻，室溫下（20-25℃）溫浴40min；
9.2.3甩干孔中液體，用洗滌工作液（250ul/孔）洗滌微孔板4-5次，最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體；
9.2.4洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50?l底物液A，再加 50?l底物液B，輕微晃動(dòng)使之混勻；
9.2.5室溫下（20-25℃）溫浴15min（若顏色較淺可適當延長(cháng)至20min），每孔中加入50?l終止液，混勻，在450nm下檢測吸光度，結果在5min內讀取。
10 結果計算
推薦使用快靈Log/Logit計算程序對檢測結果進(jìn)行計算，將檢測OD均值和標準品濃度輸入，即可自動(dòng)獲得檢測結果，再乘以稀釋倍數，即為樣品種嘔吐毒素濃度。
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